自1975年Kohler和Milstein发现单克隆抗体杂交瘤技术，就已逐渐成为制备单抗的主要技术之一。杂交瘤技术是将骨髓瘤细胞与免疫的动物脾细胞融合，形成能分泌针对该抗原的均质的高特异性的抗体—单克隆抗体。

图1. 单克隆抗体制备流程

相较于传统的免疫动物方法制备抗体，利用杂交瘤技术可以制备出高纯度的单抗，并且可以进行单克隆抗体的大量生产。然而杂交瘤过程中产生的杂交瘤细胞有可能会丢失高特异性和高活性序列，由于细胞状态不好也有可能会无法继续后续的研究。

对此，则需要进行杂交瘤测序。经过杂交瘤测序，可以在获得相应的序列后，以重组蛋白的方式来稳定获得抗体，从而使研发或生产者不必以杂交瘤细胞为载体保留该抗体，而是以碱基序列的形式进行保存和传播交流、鉴定。同时还可以使用获得的测序结果进行专利等知识产权方面的申请和审批。了解杂交瘤所表达的抗体对应的基因序列是进行大规模生产、抗体人源化以及抗体工程化的前提。

为了更好的提供全面可靠的杂交瘤细胞株测序，安升达提供基于不同测序平台的技术方案：

• 杂交瘤细胞抗体基因测序（HybSeq™）：基于传统的Sanger平台，检测抗体基因可变区或抗体基因全长
• 杂交瘤抗体基因谱测序（HybSeq-HT™）：安升达特色服务，基于高通量测序平台，可对多个样本进行一站式的扩增测序以及下游分析。无需进行单克隆操作，一次完成上千条（克隆）重轻链测序，检测出样本中所有类型抗体productive序列，样本所有序列提供Igblast比对注释结果，方便下一步分析筛选，大大提高了抗体测序通量和准确性，降低客户成本。帮助药厂或者其他客户进行大规模测序，实现高通量筛选的目的。

服务优势

杂交瘤细胞抗体基因测序（HybSeq™）:

• 低偏好：采用5’RACE法进行反转录，确保精准无误地测出序列信息，可最大程度避免PCR偏好性；
• 高保真：使用高保真酶进行PCR扩增，可最大程度避免扩增引物的突变；
• 周期快：基于Sanger测序平台可进行急速交付，最快5个工作日即可拿到测序结果；
• 高准确：通过IgBlast验证及Germline比对确保结果的准确性。

杂交瘤抗体基因谱测序（HybSeq-HT™）：

交付内容

安升达一站式抗体创新解决方案

基于安升达现有一代、二代、三代测序平台、基因合成平台，我们和合作伙伴共同开发的抗体解决方案围绕从抗体基因发现到蛋白表达的一站式解决方案。

抗体蛋白表达一站式服务流程图

服务周期

服务优势

• 周期短：速度快，从抗体发现到蛋白交付只需要3-4 周；
• 表达高：蛋白表达量高，可以达到毫克级别；
• 纯度高：利用SEC-HPLC 和SDS-PAGE 检测确保纯度达到90% 以上；
• 体系优：可以提供优化的抗体表达体系和优化的抗体基因序列，包括密码子优化等；
• 一站式服务：可以提供从NGS 测序，基因合成到蛋白表达的一站式服务，节约周期和降低成本。

更多抗体表达信息，请查看往期推文：抗体真核表达系统及表达优化策略