引物纯化方式选择指南
为了提高纯化效率,提高引物合成质量,安升达提供多种引物纯化方式:DSL(脱盐)纯化,tPAGE纯化,hPAGE纯化,HPLC纯化。
tPAGE和hPAGE纯化
tPAGE纯化和hPAGE纯化是安升达针对原PAGE纯化技术进行升级后推出的两种引物纯化方式,可以应用于不同长度类型的引物,纯化效果优于PAGE纯化级别,价格更优惠!
tPAGE: 针对60 mer以下的普通引物,推出的PAGE级别的纯化方式,拥有更优的合成程序。相比于传统PAGE,纯化速度快,质量更稳定。
hPAGE:对60 mer以上的普通引物的纯化特别有效。双重精制,既可以去除合成中的短链引物也可以去除合成中的盐分,保证引物的纯度。对90mer以下的引物,hPAGE纯化后,纯度可大于90%。
其他引物纯化方式介绍
脱盐(DSL):又称为简易反相柱,氨盐可以被有机溶液洗脱,但不会被水洗脱,能有效的去除盐分,纯度可满足大多分子生物学实验需求。优点:速度快,价格优,通量大。缺点:该方法不能有效去除比目的片段略短的引物小片段。
高效液相(HPLC):采用高效液相色谱的原理,对引物DNA进行纯化是一种非常有效的纯化方式,能达到很高的纯度和灵敏度。纯化后,引物的纯度可大于90% 。特别适合用于短链(小于40 mer)引物和修饰引物的纯化。优点:对纯化短链引物(<40 mer)特别有效,缺点:成本高,批量生产效率不高。如实验对纯度要求非常高,建议选用HPLC与hPAGE双重精制。
引物纯化方式的适用范围及建议
纯化方式 | 引物要求 | 应用 | ||||
5~10 mer | 11~40 mer | 41~60 mer | 61~90 mer | 91~150 mer | ||
DSL纯化 | 适用 | 适用 | 适用 | 适用 | 不适用 | 常用于PCR扩增、亚克隆、点突变、全基因合成及Sanger测序等。 |
tPAGE纯化 | 适用 | 推荐 | 推荐 | 不适用 | 不适用 | 针对60 mer以下的普通引物,推出的PAGE级别的纯化方式。 |
hPAGE纯化 | 不适用 | 适用 | 适用 | 推荐 | 推荐 | 对60 mer以上的普通引物的纯化特别有效,用于定点突变、克隆、 蛋白结合凝胶迁移电泳分析、治疗与诊断。 |
HPLC纯化 | 推荐 | 推荐 | 适用 | 适用 | 不适用 |
小于40 mer的普通引物的纯化,用于定点突变、克隆、 修饰引物的纯化; 商业化的诊断引物或探针。 |