针对大家都关心的一些问题，如取样、制备及送样要求等，小编进行了汇总整理，快来看一下吧!

 

1、样品制备

动物组织

对于哺乳动物样品，优先选取肌肉或者娇嫩的内脏器官如脾脏、肝脏和大脑，活体解剖取样后，剔除结缔组织和脂肪组织等非研究所需的组织，并将组织分割成50mg左右的小块(组织块越小，保存效果越好)，分装到冻存管中。

如果组织块表面血液过多，可使用0.9%的生理盐水或PBS缓冲液迅速冲洗，去除血渍和污物。将分装好的样品迅速投入液氮中速冻，置于-80℃冰箱中保存，干冰运输。如果需要胰腺、胃等含有消化液的组织，需尽可能更快的处理好组织，原因在于这类组织由于消化液的存在，降解异常迅速。

昆虫样品可能会有污染，建议进行饥饿处理或者喂食抗生素。

若在野外取样，需将样品置于盛有约100mL 95%乙醇溶液或含50mmol/L EDTA的70%乙醇溶液的小口塑料瓶中固定保存，24小时换固定剂一次。

不同物种不同组织器官DNA得率会存在一定差别，代谢旺盛的肝脏组织DNA含量较高，脂肪组织不易提取，得率较低。

植物组织

提取植物组织DNA，尽量选用新鲜样品，其次才是冻存的样品，反复冻融的样品DNA很容易受到破坏，不建议使用。样品采集时需选取幼嫩的组织部位，相对于其他组织，叶片DNA更易提取，建议优先选取叶片组织。

取样时事先准备好锡箔或铝箔纸，并用油性记号笔标记好样本信息。由于植物表面可能会有细菌或者真菌污染，在采集时可用清水冲洗干净，并用吸水纸吸干样品表面液体。

取得所需样品后，立即用准备好的锡箔纸包裹组织，并迅速投入液氮中速冻，-80°C保存，使用干冰运输。

血液样品

对于哺乳动物及人的血液样品，一般选取全血，加入抗凝剂，轻柔颠倒混匀后保存，推荐使用ACD抗凝剂或EDTA抗凝管抽取新鲜血液，由于肝素抗凝会影响实验结果，不建议使用。一般来说，1mL血液可提取3~5μg的DNA。

若血液样品不能立即寄送，要置于-80℃储存，使用干冰运输(在一周内寄送，可于-20℃运输)。若储存时间过长或有溶血、凝血的血液样品不能使用，建议重新制备样品。

 

2、送样标准

对于送样量，要满足以下要求。

对于核酸样品，还需要注意以下几个方面：

二代测序(常规小片段文库)：

核酸质量≥300ng， OD260/280比值在1.8-2.2之间， 浓度≥10ng/μL， 体积≥10μL。琼脂糖凝胶电泳DNA 条带清晰无降解，无RNA 和蛋白污染。

 

三代测序(20K文库)

核酸质量≥20μg;浓度≥100ng/μL ，OD260/280比值1.8-2.0，OD260/230比值2.0-2.2。 Nanodrop浓度与 Qubit浓度比值≤2;样品澄清无色，无不溶解物;脉冲电泳DNA条带清晰无降解，无RNA和蛋白污染。

 

3、样品包装运输注意事项

1、不要用纱布(样本易粘附在纱布上)、纸张(低温冻存易碎)直接包裹样本，而是用铝箔或进口冻存管包装。

2、在包裹样本的铝箔或进口冻存管表面，用油性记号笔标明样本编号等信息，并且不要与乙醇等有机溶剂接触。

3、不要用玻璃容器或密封性不好的容器在液氮中保存样本(玻璃器皿或密封性不好的容器从液氮中取出后会发生爆炸);样本包装中不要使用透明胶带(胶带在低温条件下粘性减弱，易掉落)。

4、不要把标签纸或其他纸制的说明性文件放入样本袋内，因为纸张在液氮中易碎。

5、不要在一只样本袋中放过多的样本，以防无法放入液氮罐或无法从液氮罐中取出。

6、客户在填写《样本信息单》时应当详细描述样本的类型、处理方法、储存条件、储存时间以及需要进行的检测类型等相关细节，以便技术人员确定合理的样本抽提或处理方案。

7、干冰使用量：24小时到达的，干冰数量不得低于5公斤;大于24小时到达的，建议保证每天3公斤的干冰数量。夏季可以适当再多增加部分干冰(平时的 1.5 倍)。

关于高通量测序DNA样品制备，就说到这里啦~

如果您还有其他疑问，可以发送邮件至NGS.Service@Azenta.com，或拨打电话400-8100-669 选项3进行咨询，2018我们继续同行。