兼并引物PCR (degenerate primer PCR) 是指用设计引物的方法来扩增所有已知顺序核苷酸序列的PCR 法。因为密码子具有兼并性,为了扩增一些已知编码顺序的核酸序列,可通过设计兼并引物进行扩增。
兼并碱基,也称为简并碱基,是根据密码子的兼并性,用一个字母符号代替某两个或者更多常规碱基。兼并引物就是含有兼并碱基的引物序列的混合物。
传统合成方法,由于反应顺序、反应活性不同,难以控制,最终得到的比例就会和设计的相差甚远。
AZENTA开发出调和比例提前预混合的方案专门用于解决兼并引物合成。
Trimer引物是3个核苷按预定种类和顺序连接起来所形成的三联核苷(Trimer phosphoramidites),这些不同的三联核苷与不同的氨基酸的一一对应。将多种Trimer引物作为整体的合成原料,合成至序列中预定位置,即可得到符合预定序列的引物库。
独立生产工艺流程
精准兼并碱基混合
严格质量控制标准
专享优质定制服务
本案例中,安升达准确构建了由11个定制氨基酸组成的突变文库,包含部分使用频率在5%以内的氨基酸。
结果展示的序列中,每一位点上实际构建得到的氨基酸对比符合预期。利用高通量测序检测,文库多样性、均一性良好。
兼并引物混合方式对比