基因敲除：移码突变

CRISPR/Cas是一种原核生物的自适应免疫系统，抵御来自噬菌体或外源质粒的入侵。这个原核生物系统的已广泛被分子生物学所采用，目前已成为基因组工程最强大和最通用的平台之一。 CRISPR/Cas9是一种简单而快速的工具，不仅可对各种物种（动物、植物、微生物等）中的内源基因进行有效修饰（敲除、敲入、定点突变），对其进行优化还可实现强大的转录抑制或靶基因的激活。CRISPR/Cas9的简便性使其在许多领域广泛应用，包括基础研究，生物技术和生物医学^[1,2,3]。
CRISPR/Cas9编辑系统是在sgRNA（约20nt，与靶基因序列互补）的引导下，Cas9特异性切割目标基因，造成DNA双链的断裂（double-strand DNA breaks，DSBs），从而引起生物体内的DNA损伤修复。这种修复作用主要包括两种途径，一种是利用非同源重组（NHEJ）的修复，即易错修复，可能造成基因组的随机插入或缺失突变，这种方式常导致靶基因失去功能，基因敲除就是利用该修复机制^[1,2]。另一种是利用同源重组修复（HDR），即精准修复，借助外源引入一段与预期编辑位点上下游紧邻且高度同源的DNA修复模板（donor，可以是短单链DNA序列（ssDNA）或质粒）介导序列的替换或插入，基因敲入和定点突变就是利用该修复机制^[3]。