IVT RNA合成

体外转录（IVT）是一种实验室常用的技术，主要是利用含有T7启动子，T3或SP6启动子序列的DNA为模板，分别在含有T7、T3或SP6 RNA聚合酶的条件下，以NTP或者修饰碱基为底物合成与模板DNA中一条链互补的RNA，可以在无细胞环境中大量生成RNA分子。IVT RNA在RNA疫苗，基因编辑，多能干细胞的生成以及基于RNA扩增的诊断技术的开发方面发挥了重要作用。

Azenta安升达基于丰富的核酸合成经验以及先进的RNA质控设备，拥有完善的RNA生产平台，为医药企业、基因治疗公司和科研机构提供RNA合成服务。生产规模从μg到mg级别，产品交付周期短、质控严格，能满足医药公司临床前研究和科研机构基础研究等需求，帮助加速科研进程。

服务优势

一站式服务——从基因合成到IVT RNA合成

多种规格——提供从μg到mg级别的IVT RNA合成服务

多种产品类型——mRNA、circRNA、sgRNA、dsRNA

多种选择——提供现货和定制化服务，满足客户不同科研需求

服务流程

RNA合成服务流程

定制化服务

安升达可提供IVT mRNA、circRNA、sgRNA和dsRNA的合成服务，满足客户不同研究领域的应用需求。

mRNA的修饰包括：加帽、加尾、核苷酸修饰（Ψ或N1-Me-Pseudo UTP）。

产品类型	长度	规格	修饰
mRNA	81-6000 nt	100 μg-10mg	加帽、加尾、核苷酸修饰（Ψ，N1-Me-Pseudo UTP或5mC）
	81-6000 nt	＞10mg（咨询）
	＞6000 nt	咨询
circRNA	81-3000 nt	20 μg-1mg	无修饰
	＞3000nt	咨询	无修饰
sgRNA	＜150nt	订购量可定制	-
dsRNA	＜8000 nt		-
siRNA*	20~25nt		提供多种核苷酸修饰定制

*：siRNA为化学合成

现货产品

名称	修饰类型	规格
copGFP	帽子结构：Cap1 UTR：5’UTR+3’UTR 修饰碱基：无修饰/N1-Me-Pseudo UTP Poly（A）长度：110 nt	100 μg/tube 浓度：1 μg/uL 缓冲液：Rnase-free water 可选干粉发货
Luciferase	帽子结构：Cap1 UTR：5’UTR+3’UTR 修饰碱基：无修饰/N1-Me-Pseudo UTP Poly（A）长度：110 nt	100 μg/tube 浓度：1 μg/uL 缓冲液：Rnase-free water 可选干粉发货
mCherry	帽子结构：Cap1 UTR：5’UTR+3’UTR 修饰碱基：无修饰/N1-Me-Pseudo UTP Poly（A）长度：110 nt	100 μg/tube 浓度：1 μg/uL 缓冲液：Rnase-free water 可选干粉发货
Cas9	帽子结构：Cap1 修饰碱基：无修饰/N1-Me-Pseudo UTP Poly（A）长度：110 nt	100 μg/tube 浓度：1 μg/uL 缓冲液：RNase-free water 可选干粉发货
copGFP-circRNA /Luciferase-circRNA /mCherry-circRNA /Cas9-circRNA	/	10 μg/tube 浓度：1 μg/uL 缓冲液：RNase-free water 可选干粉发货

QC检测

	检测项目		检测方法
标准	Linear RNA	DNA模板测序	Sanger测序
		浓度	nanodrop定量
		纯度/完整度	A260/280
		纯度/完整度	琼脂糖凝胶电泳
	circRNA	纯度	RNaseR消化
	circRNA	接口测序	Sanger测序
定制化*	Linear RNA	RNA长度及完整性	毛细管电泳（2100，2200等）
		加帽效率检测	LC-MS
		polyA长度检测	酶切和CE
		RNA-SEQ	NGS测序
		蛋白质残留	Nano Orange 分析
		DNA残留	qPCR
		dsRNA含量	ELISA
		内毒素（定量）	定量
		内毒素（半定量）	半定量
		生物负载	生物负载实验
	circRNA	纯度	毛细管电泳检测
	circRNA	circRNA全长鉴定	反转录后PCR扩增，Sanger测序

注：* 定制化的QC均需要支付额外的费用。

案例1 不同长度mRNA合成

RNA-不同长度mRNA合成

1:113 nt RNA; 2:164 nt RNA; 3:303 nt RNA; 4:1336 nt RNA; 5:1926 nt RNA; 6: 3204 nt RNA; 7: 4001 nt RNA; 8: 7192 nt RNA; 9:5292 nt RNA;

案例2 IVT合成cap1和Ψ修饰的mRNA

加帽加尾以及Ψ修饰，可提高IVT mRNA的稳定性并且增强其翻译能力，降低mRNA的免疫原性。

N1-Me-Pseudo UTP修饰的mRNA，转染到HEK293T细胞中，可以高效的表达coGFP.荧光蛋白

IVT合成cap1和Ψ修饰的mRNA

案例3 circRNA合成

结果显示，安升达升级优化生产工艺后合成的环状RNA，接口处序列正确，纯度高，

无Linear RNA等其他杂质，稳定性高，细胞转染7天后仍稳定表达。

图片1IVTRNA合成更新

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