基因KO/KI 相关服务的使用说明

感谢您订购安升达的基因KO/KI 相关服务!以下为产品的使用注意事项，请仔细阅读以下说明并按要求操作，希望对您的实验有所帮助。

【冻干质粒/ssDNA】

使用时，请将样品管于12000转/分钟离心1分钟，使DNA聚集到管底，小心开启管盖，以免引起粉末飞扬丢失。 再加入适量ddH2O或TE缓冲液，盖好管盖，涡旋震荡使其充分溶解。

【液态质粒】

使用时，请将样品管于12000转/分钟离心1分钟，使DNA聚集到管底，再开启使用。质粒的保存温度为-20°C，如果您不是一次性用完，可先分装成多管，分步取用，以免反复冻融对质粒质量产生影响。

【穿刺菌】

穿刺菌4°C可贮存1个月。扩大培养时，您可挑取部分穿刺菌接种到3~5mL的液体培养基中，37°C培养。如需长期使用，您可取部分活化后的菌液制备成甘油菌，-80°C保存。

【甘油菌】

甘油菌-80℃可长期保存。

扩大培养时您可以选择以下两种方法：

挑取甘油菌一环，接种在LB固体培养基上(活化菌种)，37℃ 培养过夜(约16 小时);挑取一个菌落转接在LB液体培养基中，37℃ 振荡过夜(约12~16小时)。

直接吸取10~20 μL甘油菌，接种在LB液体培养基中， 37℃ 振荡过夜(约12~16 小时)。

【常温细胞】

收到T25培养瓶装的细胞后请尽快进行以下实验：

首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请及时与安升达基因编辑部门联系;

用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2~4小时，以便稳定细胞状态;

静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态;

贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代;若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5mL左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松;

悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50mL无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5mL培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5mL;若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。

如需长期使用，您可将传代了的细胞冻存在-80°C保存。