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细菌和噬菌体直接测序(RCA服务)

自1999年起,金唯智持续优化测序流程,并借此推进基因组的研究。金唯智的滚环扩增(Rolling Circle Amplification, RCA)服务帮助客户直接使用细菌或噬菌体进行测序,而无需制备质粒。

滚环扩增(RCA)使用随机六聚体引物对环状模板进行复制,以此获得供测序使用的DNA。金唯智RCA方案能够处理任何规模的测序项目;并且经过我们的优化,可直接使用细菌样本(平板菌落、甘油菌和新鲜菌液)和噬菌体样本(噬菌斑或上清液)获得高质量的序列。当DNA起始材料(例如低拷贝质粒)较少时,RCA也十分有效。


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RCA概述

RCA 是在生物体内发现一种DNA复制机制,常见于质粒和病毒增殖过程。在恒温条件下,将随机六聚体与链置换DNA聚合酶结合使用,将会生成许多单链DNA聚合分子,每个单链DNA分子由大量反复衔接的环形DNA链拷贝构成(Dean等人,2001年) 。在每个RCA扩增周期中,新生成链将会被置换,并且提供新的引物结合位点。由于RCA反应中的随机引物可自由配对至模板的两条链上,指数式扩增也得以实现。

RCA过程

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在细胞裂解后,向细菌样本中加入dNTPs、phi29聚合酶以及随机六聚体。随机引物退火至环状模板上,并且同时在许多点上开始复制。
phi29聚合酶具有高稳定性、长持续能力和高保真度的特性,保证其能在多个扩增循环周期中持续进行链置换。
新合成链持续被置换并不断提供新的结合位点,保证新复制事件得以开启;模板借此实现指数式扩增。
扩增6~12 h后,对RCA反应体系加热使phi29失活;此时的产物已可用于测序。

服务优势

高质量

Sanger测序读取长度保证800 bp,最长可读到1000 bp。每份测序结果均提供质量得分(QS)和连续读长(CRL)。

复杂结构的测序方案

有效提升发夹结构和高GC含量 DNA的测序成功率。

金唯智技术支持

金唯智的技术支持会无偿地与您探讨项目进展,解决技术难题。咨询时间为每个工作日上午8点30至下午9点。周末正常发送结果,以供您周末使用。

技术平台

使用ABI 3730XL 自动测序仪的毛细管电泳和荧光标记技术对您的样品进行测序。

方便

联系我们,我们会告知您距离最近的样品箱或运送服务地点,向您提供装运服务。

免费的通用引物

金唯智通用引物适合于大多数商业化载体。您可使用我们的通用引物选择工具,确定适用的通用引物。

便捷的在线系统

金唯智在线订单系统帮助您随时随地进行在线订购,订单进度查询以及历史数据管理。

合成引物测序

金唯智自有引物合成平台,可为您快速合成指定序列的引物。

应用

shRNA克隆和库筛选:无需制备质粒,可直接对菌落测序。
抗体噬菌体展示库验证:直接对噬菌体进行测序,以便更快地完成筛选和确认。
DNA甲基化分析:直接对PCR产物克隆后的菌落进行测序,从而节约大量时间并获得高质量序列。

样品提交选项

样品提交选项

甘油菌* 寄送1.5 ml 离心管或96孔板;样品必须采用干冰装运。请标明培养基类型。
平板菌落* 在平板上按顺序编号并接种,或将待测克隆圈选标注并编号;若无编号将随机挑选。如果使用液体培养基,请将样本分装至96孔板中,并用8联管盖密封。如果提供平板菌落,请将平板用封口膜密封,并使用缓冲垫以防运输过程中出现破损。
噬菌体上清液 请将50 ul的噬菌体上清液装入8联PCR管或1.5 ml离心管中提交,并清晰标注样品编号。 注意:部分实验室并不提供噬菌体测序服务,请与您的销售联系确认。
噬菌斑 请将待测的噬菌斑圈选标注并编号。请将平板用封口膜密封,并使用缓冲垫以防运输过程中出现破损。

* 温馨提示:RCA方案可能对部分表达载体和表达菌株不适用。

部分实验室不提供噬菌体测序服务,邮寄样品前请与我们联系确认。

如需细菌和噬菌体模板的更多相关信息,请阅读金唯智Sanger测序样品制备指南

 

订购流程


有药物申报需求的客户,可以下载DNA测序(类GLP)服务样品信息表,按要求填写完成后,随样品一起寄送给我们

Email | 400-8100-669 选项 1 | 在线咨询.