Sanger测序样品制备指南


 

Sanger测序订单表点击下载

如果您有疑问或需要咨询项目相关事宜,可以随时联系安升达的技术支持。

Email | 400-8100-669 选项 1


技术要点说明

关于如何设计引物


请确保引物与模板相匹配,两者不匹配会导致测序结果不佳。 设计引物参数如下:

  • 引物长度应在18-24bp之间
  • 退火温度(Tm)应在50-60℃之间
  • GC含量在45-55%之间
  • 3′端含一个G或C
  • 3′端的序列与模板严格互补
提示:引物的单位是pmol/µl=µM

关于如何纯化PCR产物

建议您选用商业化的试剂盒进行切胶纯化,纯化的产物溶解在灭菌水中。

如果您的PCR产物存在非特异条带,请务必在送样前进行切胶纯化。

如果您的样品是单一条带,安升达将为您提供纯化服务。建议您对样品提前进行纯化,我们会对已纯化样品进行优先安排测序。

关于如何设定Sanger测序的模板浓度(针对预混合服务)


对质粒来说,模板的浓度就是模板的碱基长度(kb)乘以10ng/µl
即最佳质粒浓度=10 ng/µl×kb。
例如:您有一个4.5kb长的质粒(载体+插入片段),将质粒的长度(kb)扩大10倍,也就是说,该质粒最佳的测序浓度为45ng/µl。
因为我们需要10µl的模板量,因此您需要提交给我们450ng的质粒。


对纯化的PCR产物来说,测序模板的浓度为模板的长度(kb)乘以2ng/µl。
即纯化的PCR产物的最佳浓度=2ng/µl×kb。
例如:您的PCR产物为700bp,将它的kb数扩大2倍。也就是说,该PCR纯化产物的最佳测序浓度为1.4 ng/µl。
因为我们需要10µl的模板量,因此您需要提交给我们14ng的PCR纯化产物。
售 前 咨 询
售前客服

 

gogoanime